Состояние естественной резистентности и иммунологической реактивности у новорожденных телят при колибактериозе



РУБРИКИ	Состояние естественной резистентности и иммунологической реактивности у новорожденных телят при колибактериозе	РЕКЛАМА

Главная

Логика

Логистика

Международное публичное право

Международное частное право

Международные отношения

Авиация и космонавтика

Административное право

Экономико-мат. моделирование

Экономическая география

ПОИСК

Состояние естественной резистентности и иммунологической реактивности у новорожденных телят при колибактериозе

реагировать на антигенную инокуляцию зависит от возраста телят и

естественно от иммуногена [С. С. Gay, 1971].

Глобулиновая фракция молозива, ответственная за защиту телят не была

идентифицирована, несмотря на то, что различные антитела, имеющиеся в

молозиве, трансформируются в сыворотку неонатальных телят [R.

Aschaffenburg, S. Bartlett, S. K. Kon, P. Terry, S. Y. Thompson and D. M.

Walker, 1949a; R. Aschaffenburg, S. Bartlett, S. K. Kon, D. M. Walker, C.

Briggs, E. Cotchin and R. Lovell, 1949b].

Антигены приготовили из трех серотипов Е. coli. Серотипы О78:К80;

О119:К69; О137:К79 были изолированы от телят с инфекционной диареей в

учхозе «Кетросу» района Анений Ной. Бактерии выращивали на МПА 8-10 ч при

37° С в бактериальных матрацах. Клетки смывали из агара стерильным

физиологическим раствором хлорида натрия и бактериальную суспензию

автоклавировали при 120° С в течение 2 ч для разрушения К-антигена. Густую

отмытую суспензию смешивали с ацетоном в отношении 1:5 до появления

коагуляции (свертывания). Плотную часть материала отбирали на воронке

Бюхнера промытой один раз ацетоном и затем высушенной эфиром. Препарат был

высушен на воздухе и сохраняли при 4° С.

Сухой порошок применяли для приготовления суспензии антигена, добавляя 1

мг высушенных ацетоном бактерий к 1 мл барбиталового буферам [E. Neter,

1957].

Молозиво получали от 23 коров при первом доении после отела.

Двадцать три пробы цельного молока получали от коров средней лактации,

сравнивая уровень антител с уровнем в молозиве из того же стада

(коровника). Молочную сыворотку приготовляли из молозива и молока и

тестировали на антитела, тем же методом что и сыворотку крови. Пробы крови

отбирали у телят вскоре после рождения с интервалом 12-24 ч. Кровь

выдерживали при комнатной температуре до появления сгустка и сыворотку

отделяли в течение 6 ч. Пробы сыворотки крови, молозива и молока хранили

при –20° С до тестирования.

2.2.7.1. Серологический тест. Сыворотку инактивировали при 56° С в

течение 30 мин для разрушения комплементной активности. Все сыворотки, в

том числе молозивные и молочные, абсорбировали с эритроцитами барана,

исключая какие либо антитела к эритроцитам. Агглютинирующие антитела

определяли по методу E. Neter, E. A. Gorzynski, R. M. Gino, O. Westphal and

O. Luderwitz, 1956, за исключением того, что эритроциты барана были

утилизированы и был приготовлен антиген, высушенный ацетоном.

Антиглобулиновый тест применяли для определения титра не агглютинирующих

антител [E. Neter, 1957] используя антиглобулиновую (бычью) сыворотку. Все

титрации проводили в двукратном разведении, ранг серии от 2-2 до 2-11,

применяя 0,1 мл разведенной сыворотки и 0,1 мл 2 % суспензии антигена с

эритроцитами барана, которые были промыты 3 раза после антигенной

абсорбции.

Агглютинационный тест учитывали после 10-120 минутной выдержки при

комнатной температуре.

Антиглобулиновый тест определяли после инкубации в термостате при 37° С

в течение 1 ч и выдержки в холодильнике при 4° С в течение 12 ч.

Высшее сывороточное разведение, которое имело хорошо выраженную

агглютинацию, учитывали как титр этой сыворотки. Чувствительность антител к

2-меркаптоэтанолу определяли инкубированием сыворотки на 0,1М растворе

CH2SH-CH2OH, при 37° С в течение 30 мин. Резистентность к этой обработке

была взята как показание, что антитела не являются макроглобулинами.

2.2.7.2 Абсорбционный тест. Определение специфичности антител

абсорбционным методом было проведено с сывороткой молозива и крови телят.

Сывороточные образцы получали от телят через 12-24 ч после кормления

молозивом, и были разделены по уровню антител против трех антигенов.

Сыворотку молозива и сыворотку крови телят абсорбировали с каждым из трех

серотипов Е. coli , которые инкубировали в колбе-матраце на МПА.

Таблица 2.14

Уровень колостральных антител против О-антигенов Е. coli в сыворотке

молозива коров

|О78:К80 |Агглютинационный |15 |93 |7,86±0,93 |

| |Антиглобулиновый |15 |100 |9,07±0,98 |

|О119:К69 |Агглютинационный |14 |100 |8,43±0,99 |

| |Антиглобулиновый |13 |100 |9,46±1,21 |

|О137:К79 |Агглютинационный |16 |100 |9,62±0,71 |

| |Антиглобулиновый |17 |100 |10,23±0,99 |

Микроорганизмы смывали из агара барбиталовым (вероналовым) буфером и

центрифугировали при 12000 об/мин в течение 30 мин. Затем бактерии

прибавляли к сыворотке крови телят и молозивной сыворотке — 2Ч1011 бактерий

на 1 мл пробы. Абсорбцию проводили при 37° С в течение 60 мин и суспензию

центрифугировали при 12000 об/мин в течение 30 мин. Супернатант сыворотки

крови телят и молозивной сыворотки удаляли из массы клеток и выдерживали

при -20° С до тестирования.

Пробы имели достоверный титр антител против всех трех антигенов за

исключением 2-х проб, которые не имели агглютинирующих антител против

О78:К80, но имели антитела, обнаруживаемые антиглобулиновым тестом в титрах

7-8. В двух других образцах сыворотки молозива отсутствовали антитела,

выявляемые антиглобулиновым тестом против О-антигена О137:К79, но имели

агглютинирующие антитела в титрах от 2 до 5. Высшую среднюю активность

агглютинирующих и антиглобулиновых антител отмечали против О137:К79.

Затем в порядке уменьшения активности антител к О-антигену были О119:К69

и О78:К80.

Титры агглютинирующих и антиглобулиновых антител в сыворотке молока были

значительно меньшими, чем в сыворотке молозива и, в дополнение, сфера

действия антител была более ограниченной. Учитывали только средний титр

антител реагирующих против специфических О-антигенов Е. coli: О78:К80,

О119:К69, О137:К79 (табл. 2.14; 2.15).

Таблица 2.15

Уровень антител против О-антигенов Е. coli в сыворотке молока коров

|О78:К80 |Агглютинационный |15 |(3) 20 |3,0±0 |

| |Антиглобулиновый |15 |(12) 80 |3,75±0,94 |

|О119:К69 |Агглютинационный |14 |(3) 21,4 |2,67±0,57 |

| |Антиглобулиновый |13 |(7) 50 |3,86±0,90 |

|О137:К79 |Агглютинационный |16 |(4) 25 |3,25±0,50 |

| |Антиглобулиновый |17 |(13) 76,47 |4,31±1,08 |

2.2.7.3. Уровень антител против О-антигенов Е. coli в сыворотке крови

новорожденных телят. Активность антител не была обнаружена в сыворотке

неонатальных телят перед кормлением молозивом. После выпаивания молозива

сывороточные образцы от 23 телят взаимодействовали с одним или тремя

тестированными О-антигенами. Количество сывороточных проб и процент

положительных тест реакций представлен в табл. 2.16, из которой следует,

что некоторые сыворотки реагировали только в антиглобулиновом тесте, в

агглютинационном тесте реакция была отрицательной. Все сыворотки тест

позитивные в агглютинационном опыте, тестировались и в антиглобулиновой

реакции. Обработка исследованных сывороток этантиолом показала примерно те

титры антител, которые были определены агглютинационным и антиглоблииновым

методами.

Таблица 2.16

Количество образцов с положительным тест результатом при исследовании

уровня антител против О-антигенов Е. coli в сыворотке крови неонатальных

телят.

|Антиген |Количество |Положительный тест результат, % |

| |образцов | |

|О78:К80 |15 |(8) 53,3 |(10) 66,7 |

|О119:К69 |15 |(8) 53,3 |(11) 73,3 |

|О137:К79 |15 |(10) 66,7 |(12) 80,0 |

Результаты титрации парных образцов сыворотки молозива, полученного при

первом доении коров и сыворотки, приготовленной из крови телят через 12-24

ч после кормления молозивом представлены в табл. 2.17.

В таблице учтены только тест позитивные реакции против специфических О-

антигенов Е. coli : О78:К80, О119:К69, О137:К79. В некоторых пробах титр

антител в сыворотке крови телят был незначительно выше или равнялся уровню

антител в сыворотке молозива. Тем не менее, средний титр в сыворотке крови

телят был почти на два разведения меньше, чем в сыворотке молозива.

Таблица 2.17

Уровень антител против О-антигенов Е. coli в спаренных сыворотках молозива

и крови неонатальных телят.

|О78:К80 |Агглютинационный |8 |7,87±0,84 |5,37±0,87 |

| |Антиглобулиновый |10 |9,1±0,99 |5,9±0,73 |

|О119:К69 |Агглютинационный |8 |8,37±0,92 |6,12±0,83 |

| |Антиглобулиновый |11 |9,45±0,82 |7,27±0,84 |

|О137:К79 |Агглютинационный |10 |9,60±0,84 |7,3±0,77 |

| |Антиглобулиновый |12 |10,25±0,96 |9,42±0,82 |

2.2.7.4 Абсорбция антител против О-антигенов Е. coli из сыворотки

молозива и крови телят. Две пробы сыворотки молозива и 3 сыворотки крови

однодневных телят были абсорбированы Е. coli антигеном для определения

специфичности антител. Данные, полученные абсорбционным тестом,

представлены в табл. 2.18.

Все исследуемые пробы, абсорбированные антигеном, подавляли активность

антител к антигену, в то же время, как правило, превосходили антитела

против других антигенов. Антитела против антигена О137:К79 имели влияние на

абсорбцию по сравнению с другими антигенами.

Почти все пробы сывороток имели антитела в высоких титрах против О-

антигенов к трем серотипам Е. coli . Сходные антитела были выявлены в

нормальном молоке в меньшей степени и в значительно низких титрах.

Колостральные антитела вероятно, отражали контакт (инфицирование) коров с

различными серотипами Е. coli . Титр антител против О78:К80 был наименьшим

из трех тестированных антигенов. Результаты абсорбционного теста указывают,

что антитела против О78:К80 наиболее легко абсорбируются по сравнению с

другими серотипами Е. coli . Эти данные указывают, что антитела реагирующие

с О78:К80 не обладают высокой специфичностью и могут вступать в

перекрестную реакцию с другими микроорганизмами, инфицирующими коров.

Высокий уровень антител, выявляемый в сыворотке молозива, соответствовал и

высокому уровню антител в сыворотке крови телят через несколько часов после

кормления молозивом.

Таблица 2.18

Показатели абсорбции антител против О-антигенов Е. coli молозивом и

сывороткой неонатальных телят.

|Источни|Абсорбен|Титр антител |

|к |т | |

|антител| | |

| | |О78:К80 |О119:К69 |О137:К79 |

| | |АГТ* |АНТ |АГТ |АНТ |АГТ |АНТ |

|Молозив|нет |(1:32) 5|(1:128) |(1:128) |(1:256) |(1:64) |(1:512) |

|о №4456| | |7 |7 |8 |6 |9 |

| |О78:К80 |0 |0 |(1:32) 5|(1:128) |(1:64) |(1:512) |

| | | | | |7 |6 |9 |

| |О119:К69|0 |0 |0 |0 |(1:16) |(1:128) |

| | | | | | |4 |7 |

| |О137:К79|0 |0 |(1:32) 5|(1:128) |0 |0 |

| | | | | |7 | | |

|Молозив|нет |(1:32) 5|(1:64) 6|(1:32) |(1:256) |(1:64) |(1:1024)|

|о №3457| | | |15 |18 |6 |10 |

| |О78:К80 |0 |0 |(1:16) 4|(1:64) 6|(1:64) |(1:1024)|

| | | | | | |6 |10 |

| |О119:К69|0 |(1:32) 5|0 |0 |(1:64) |(1:1024)|

| | | | | | |6 |10 |

| |О137:К79|0 |(1:8) 3 |(1:32) 5|(1:128) |0 |0 |

| | | | | |7 | | |

|Сыворот|нет |(1:64) 6|(1:128) |(1:128) |(1:256) |(1:32) |(1:512) |

|ка | | |7 |7 |8 |5 |9 |

|№4757 | | | | | | | |

|) | | | | | | | |

| |О78:К80 |0 |0 |(1:16) 4|(1:128) |(1:32) |(1:512) |

| | | | | |7 |5 |9 |

| |О119:К69|(1:32) 5|(1:128) |0 |0 |(1:32) |(1:128) |

| | | |7 | | |5 |7 |

| |О137:К79|(1:16) 4|(1:64) 6|(1:128) |(1:128) |0 |0 |

| | | | |6 |7 | | |

|Сыворот|нет |(1:128) |(1:256) |(1:256) |(1:512) |(1:256)|(1:512) |

|ка | |7 |8 |8 |9 |8 |9 |

|№4759 | | | | | | | |

|) | | | | | | | |

| |О78:К80 |0 |0 |(1:32) 5|(1:64) 6|(1:128)|(1:256) |

| | | | | | |7 |8 |

| |О119:К69|(1:4) 2 |(1:8) 3 |0 |0 |(1:64) |(1:256) |

| | | | | | |6 |8 |

| |О137:К79|(1:32) 5|(1:64) 6|(1:64) 6|(1:128) |0 |0 |

| | | | | |7 | | |

|Сыворот|нет |(1:64) 6|(1:64) 6|(1:128) |(1:512) |(1:64) |(1:1024)|

|ка | | | |7 |9 |6 |10 |

|№4767 | | | | | | | |

|) | | | | | | | |

| |О78:К80 |0 |0 |(1:16) 4|(1:256) |(1:16) |(1:32) 5|

| | | | | |8 |4 | |

| |О119:К69|(1:8) 3 |(1:16) 4|0 |0 |(1:16) |(1:128) |

| | | | | | |4 |7 |

| |О137:К79|(1:16) 4|(1:32) 5|(1:32) 5|(1:512) |0 |0 |

| | | | | |9 | | |

* Титр выражен в log2 АГТ — агглютинационный тест АНТ — антиглобулиновый

тест

Антитела в сыворотках молозива и крови однодневных телят были

резистентными к инактивации CH2SH-CH2OH-меркаптоэтанолом, что указывает на

то, что они не являются макроглобулинами. Этот результат подтверждает

данные, что антитела не продуцируются новорожденными телятами, а

приобретаются после рождения из молозива. У семи из 23 телят, кормившихся

молозивом, активность агглютинирующих антител против трех О-антигенов Е.

coli не была установлена. Эти же телята имели и низкий уровень

иммуноглобулинов после кормления молозивом, что указывает на анормальную

абсорбцию иммуноглобулинов из желудочно-кишечного тракта.

2.2.8. Уровень антител против К-антигенов Е. coli в нормальном коровьем

молозиве, молоке и в сыворотке крови новорожденных телят. Большое значение

молозива в защите неонатальных телят от колибактериоза было установлено

давно [Th. Smith and R. B. Little, 1922]. Полагают, что молозиво

обеспечивает защиту в ассоциации с принадлежащей ему активностью антител

против Е. coli и, особенно, с содержащими агглютининами к К-антигену [B.

Kaijser, S. Ahlstedt, 1977].

Значение К агглютининов, как фактора в молозиве, который защищает телят

против колибактериоза установили [С. J. Howard, A. A. Glynn, 1971], после

того как некоторые телята приобретали после рождения агглютинины из

молозива, которые реагировали с К-антигеном из штаммов Е. coli

ассоциирующими с заболеванием.

Агглютинины к К-антигену из Е. coli ассоциировались с увеличением

вирулентности микроорганизмов [С. С. Gay, S. M. Parish, T. C. McGuire

1982]. Следовательно, антитела против К-антигена считают доказанным

фактором в резистентности неонатальных телят против Е. coli инфекции.

Вначале исследования по определению антител в К-антигену, проводили

прямой агглютинацией к идентифицированным микроорганизмами [E. Neter, E. A.

Gorzynski, R. M. Gino, O. Westphal and O. Luderwitz. 1956]. Более

чувствительные методы выявления антител в человеческой крови из пуповины к

энтеробактериальным антигенам были установлены при применении пассивной

гемагглютинации [E. Neter, 1957]. Антитела, выявляемые этими

чувствительными гемагглютинационными тестами, могут быть существенными в

увеличении резистентности неонатальных телят против колибактериоза. Эти

антитела, пассивно приобретенные после рождения телятами из молозива коров,

были тестированы в динамике.

В опыте находились 23 телят черно-пестрой породы в первые 5 дней. Телят

кормили молозивом, а затем свежим молоком.

Антигены приготовляли из трех серотипов Е. coli . Серотипы О78:К80,

О119:К69 и О137:К79 были изолированы от телят с инфекционной диареей в

учхозе «Кетросу» района Анений Ной. Бактерии выращивали на кровяном агаре,

при этом гладкие и слизеподобные колонии пересевали на агар Мак-Конки.

Часть колоний из агара Мак Конки были тестированы пластинчатой реакцией

агглютинации (на предметном стекле со специфическими К-антисыворотками).

Колонии-тест-положительные были отобраны для приготовления К-антигена Е.

coli.

Культивирование бактерий и приготовление антигенов было сходным с

получением О-антигенов Е. coli за исключением того, что Е. coli

применявшаяся для приготовления К-антигена не нагревалась, и для смыва

бактерий использовали солевой раствор (0,85 %), содержащий 0,5 %

формальдегида. Бактерии были экстрагированы при добавлении ацетона

непосредственно после их смыва с агаровой культуры и промыты.

Пробы молозива отбирали от 23 коров в молочном стаде учебного хозяйства

при первом доении после отела. Двадцать три пробы цельного молока получали

от коров средней лактации, сравнивая уровень антител с уровнем в молозиве.

Молочную сыворотку приготовляли из молозива и молока и тестировали на

антитела, подобным методом, как и сыворотку крови. Пробы крови отбирали у

телят вскоре после рождения с интервалом 12-24 ч. Кровь выдерживали при

комнатной температуре до появления сгустка и сыворотку отделяли в течение 6

ч. Пробы сыворотки крови, молозива и молока хранили при -20° С.

2.2.8.1. Серологический тест. Для разрушения комплементной активности

сыворотку инактивировали при 56° С в течение 30 мин. Все сыворотки в том

числе молозивные и молочные, абсорбировали с эритроцитами барана, исключая

какие-либо антитела к эритроцитам. Агглютинирующие антитела определяли по

методу Е. Neter (1957), за исключением того, что эритроциты барана были

утилизированы и был приготовлен антиген высушенный ацетоном.

Антиглобулиновый тест применяли для определения неагглютинирующих

антител [E. Neter, 1957], применяя антиглобулиновую (бычью) сыворотку. Все

титрации проводили в двукратном разведении ранг серии от 2-2 до 2-11,

применяя 0,1 мл разведенной сыворотки и 0,1 мл 2 % суспензии антигена с

эритроцитами барана, которые были промыты 3 раза после антигенной

абсорбции.

Агглютинационный тест учитывали после 90-120 минутной инкубации при

комнатной температуре.

Антиглобулиновый тест определяли после 1 ч инкубации в термостате при

37° С и 12 ч экспозиции в холодильнике при 4° С.

Предельное сывороточное разведение, которое имело хорошо выраженную

агглютинацию, учитывали как титр этой сыворотки. Чувствительность антител к

2-меркаптоэтанолу определяли инкубацией сыворотки в 0,1М растворе CH2SH-

CH2OH при 37° С в течение 30 мин. Резистентность к этой обработке была

взята как показание, что антитела не являются макроглобулинами.

2.2.8.2. Абсорбционный тест. Определение специфичности антител

абсорбционным методом было проведено с сывороткой молозива и крови телят.

Сывороточные образцы получали от телят через 12-24 ч после кормления

молозивом и были разделены по уровню антител против трех антигенов.

Сыворотку молозива и сыворотку крови телят абсорбировали с каждым из трех

серотипов у Е. coli . Три серотипа Е. coli инкубировали в колбе-матраце на

МПА.

Микроорганизмы смывали из агара барбиталовым (вероналовым) буфером и

центрифугировали при 12000 об/мин в течение 30 мин.

Затем бактерии прибавляли к сыворотке крови телят и молозивной сыворотке

из расчета 2Ч1011 бактерий на 1 мл. Абсорбцию проводили при 37° С в течение

60 мин и суспензию центрифугировали при 12000 об/мин 30 мин. Супернатант

сыворотки телят и молозивной сыворотки удаляли из массы клеток, а осадок

хранили при -20° С до тестирования.

2.2.8.3. Уровень антител против К-антигенов в сыворотках молозива и

молока. Средний титр антител в молозивной сыворотке против К антигенов из 3

штаммов Е. coli представлен в табл. 2.19. Агглютинирующиеся антитела

выявляются менее часто, чем антиглобулиновые антитела в тестированных

образцах молозива. Положительный тест — результат установлен соответственно

в 53,83 % (антиген О78:К80) и 88,24 % (антиген О137:К79) случаев. Средний

титр антител в аналогичных условиях равнялся 4,63±0,73 и 6,87±0,56.

Таблица 2.19.

Уровень колостральных антител против К-антигенов Е. coli в сыворотке

молозива коров

|О78:К80 |Агглютинационный |15 |53,33 |4,63±0,73 |

| |Антиглобулиновый |15 |80,00 |5,92±0,67 |

|О119:К69 |Агглютинационный |14 |71,43 |5,6±0,70 |

| |Антиглобулиновый |13 |92,31 |6,42±0,67 |

|О137:К79 |Агглютинационный |16 |75,00 |6,25±0,69 |

| |Антиглобулиновый |17 |88,24 |6,87±0,56 |

Из 69 исследованных проб сывороток молозива агглютининовым и

антиглобулиновым тестами 9 проб имели антитела, обнаруживаемые только

антиглобулиновым методом. Средний титр антител был существенно выше при

тестировании антиглобулиновым методом по сравнению с агглютинационным, тем

не менее, в 4 образцах получены совпадающие результаты, а в одном случае

титр агглютининов был выше на одно разведение. Средний титр был вычислен

только из тест положительных образцов. Высокий титр антител был установлен

агглютинационным и антиглобулиновым методами против К антигена серотипа

О137:К79 (6,25±0,69 и 6,87±0,56).

Результаты исследования образцов молока, полученного от коров на

различных стадиях лактации, показаны в табл. 2.20. Антитела против Е. coli

К-антигена были обнаружены в молоке агглютинационным и антиглобулиновым

методами, но частота и уровень активности антител были намного меньшими,

чем в молозиве.

Таблица 2.20

Уровень антител против К-антигенов Е. coli в сыворотке молока коров

|О78:К80 |Агглютинационный |15 |21,43 |3,33±0,58 |

| |Антиглобулиновый |15 |42,87 |3,17±0,41 |

|О119:К69 |Агглютинационный |14 |(3) 23,08 |2,67±0,58 |

| |Антиглобулиновый |13 |(8) 66,67 |3,63±0,75 |

|О137:К79 |Агглютинационный |16 |(6) 46,15 |3,17±0,41 |

| |Антиглобулиновый |17 |(11) 84,62 |4,36±0,92 |

Двенадцать из 37 проб (тест положительных) сывороток молока имели

антитела против 3 тестированных антигенов. Причем 12 проб были тест

положительными при исследовании как агглютинационным, так и

антиглобулиновым тестами, 27 тест положительных проб выявляли только

антиглобулиновым методом. Из 14 проб сывороток молока выявляли антитела

против К антигена Е. coli штамм О78:К80 в трех совпадающих пробах

агглютинационным и антиглобулиновым методом. Антитела к К антигену Е. coli

штамм О119:К69 выявлены тестированными методами из 13 проб в 3 случаях и

дополнительно в 5 случаях только антиглобулиновым методом. Антитела к К

антигену Е. coli штамм О137:К79 выявляли в 6 совпадающих случаях обеими

методами и дополнительно в 5 пробах только антиглобулиновым методом.

2.2.8.4. Уровень антител против К антигена в сыворотке новорожденных

телят. Результаты исследования сывороточных проб телят в возрасте от 1 до 5

дней указывает, что большинство телят приобретают после рождения антитела,

выявляемые антиглобулиновым, а не агглютинационным тестом. Сопоставление

уровня антител в сыворотке молозива и в сыворотке крови телят через 12-24 ч

после кормления молозивом, представлены в табл. 2.21.

Таблица 2.21

Уровень антител против К-антигенов Е. coli в спаренных сыворотках молозива

и крови неонатальных телят.

|О78:К80 |Агглютинационный |5 |4,40±0,54 |3,20±0,45 |

| |Антиглобулиновый |5 |6,80±0,87 |5,80±0,45 |

|О119:К69 |Агглютинационный |7 |5,43±0,53 |4,14±0,37 |

| |Антиглобулиновый |6 |7,17±0,41 |6,17±0,41 |

|О137:К79 |Агглютинационный |6 |5,83±0,41 |4,83±0,41 |

| |Антиглобулиновый |7 |7,43±0,53 |6,71±0,48 |

В нескольких случаях титр антител в сыворотке крови телят был

эквивалентным уровню колостральных антител, но, как правило, титр антител в

сыворотке телят был меньшим на 1-2 разведения, чем титр в сыворотке

молозива. Телята, лишенные молозива, не содержали антител против К антигена

Е. coli тестированных серотипов. Антитела в молозиве и антитела в сыворотке

неонатальных телят не инактивировались при обработке 2-меркаптоэтанолом

CH2SH-CH2OH. Средний титр антител в сыворотке крови телят, кормившихся

молозивом варьировал в зависимости от тестированных К антигенов Е. coli

О78:К80, О119:К69, О137:К79. Существенное различие в уровне антител

установлено при их выявлении агглютинационным и антиглобулиновым

методами(табл. 2.22).

Уровень антител при исследовании антиглобулиновым методом был на 2-3

разведения большим по сравнению с агглютинационным тестом.

Таблица 2.22

Количество образцов с положительным тест результатом при исследовании

уровня антител против К-антигенов Е. coli в сыворотке крови неонатальных

телят.

|Антиген |Количество |Положительный тест результат, % |

| |образцов | |

|О78:К80 |16 |31,25 |33,33 |

|О119:К69 |16 |33,33 |56,26 |

|О137:К79 |16 |31,25 |62,5 |

2.2.8.5. Абсорбция антител против К-антигенов Е. coli из сыворотки

молозива и крови телят. Результаты абсорбционного теста колостральных

образцов, полученных от коров при первом доении после отела и сывороточных

образцов, взятых у телят в течение 1 дня после кормления молозивом

представлены в табл. 2.23.

Все исследуемые пробы, абсорбированные антигенами, подавляли активность

антител к антигенам Е. coli О78:К80, О115:К69. Антитела против антигена

О137:К79 имели наименьшее влияние на абсорбцию по сравнению с другими

антигенами. Два серотипа Е. coli О78:К80, О119:К69 имели К антиген В типа,

тогда как серотип О137:К79 имел К антиген А типа. Это различие в типах К

антигена и имеет значение в перекрестной реакция с серотипом О137:К79.

Таблица 2.23

Показатели абсорбции антител против К-антигенов Е. coli молозивом и

сывороткой неонатальных телят.

|Источник |Абсорбе|Титр антител |

|антител |нт | |

| | |О78:К80 |О119:К69 |О137:К79 |

| | |АГТ* |АНТ |АГТ |АНТ |АГТ |АНТ |

|Молозиво |нет |0 |(1:32) |0 |(1:64) |(1:32) |(1:64) 6|

|№4456 | | |5 | |6 |5 | |

| |О78:К80|0 |0 |0 |0 |0 |0 |

| |О119:К6|0 |0 |0 |0 |0 |0 |

| |9 | | | | | | |

| |О137:К7|0 |(1:16) |0 |0 |0 |0 |

| |9 | |4 | | | | |

|Молозиво |нет |0 |(1:16) |0 |(1:32) |(1:64) |(1:16) 4|

|№3457 | | |4 | |5 |6 | |

| |О78:К80|0 |0 |0 |0 |0 |0 |

| |О119:К6|0 |0 |0 |0 |0 |0 |

| |9 | | | | | | |

| |О137:К7|0 |0 |0 |0 |0 |0 |

| |9 | | | | | | |

|Сыворотка |нет |(1:8) 3|(1:128)|(1:64)|(1:128)|(1:128)|(1:1024)|

|телят №4757 | | |7 |6 |7 |7 |10 |

| |О78:К80|0 |0 |0 |0 |(1:64) |(1:128) |

| | | | | | |6 |7 |

| |О119:К6|0 |0 |0 |0 |(1:64) |(1:512) |

| |9 | | | | |6 |9 |

| |О137:К7|0 |0 |0 |0 |0 |0 |

| |9 | | | | | | |

|Сыворотка |нет |(1:32) |(1:128)|(1:32)|(1:256)|(1:64) |(1:512) |

|телят №4759 | |5 |7 |5 |8 |6 |9 |

| |О78:К80|0 |0 |0 |0 |0 |0 |

| |О119:К6|0 |0 |0 |0 |0(1:64)|0 |

| |9 | | | | |6 | |

| |О137:К7|0 |0 |0 |0 |0 |0 |

| |9 | | | | | | |

|Сыворотка |нет |0 |(1:64) |(1:16)|(1:64) |(1:32) |(1:128) |

|телят №4767 | | |6 |4 |6 |5 |7 |

| |О78:К80|0 |0 |0 |0 |0 |(1:16) 4|

| |О119:К6|0 |0 |0 |0 |(1:16) |(1:64) 6|

| |9 | | | | |4 | |

| |О137:К7|0 |0 |0 |0 |0 |0 |

| |9 | | | | | | |

* Титр, выраженный в log2

АГТ — агглютинационный тест

АНТ — антиглобулиновый тест

Наличие и титр антител против К антигенов Е. coli О78:К80, О119:К69 и

О137:К79 в молозиве был ниже, чем антитела против О антигенов в тех же

самых пробах. Процент тест положительных молозивных образцов с К-антигенами

составлял при исследовании агглютинационным методом от 53,33 да 75,00, а

при исследовании антиглобулиновым методом от 53,33 до 88,24, тогда как асе

образцы были тестированы положительно с Е. coli О антигенами. Анти-К

активность антител в молоке имела частоту и титр ниже, чем активность в

молозиве. Пробы молока не имели антител против всех трех К антигенов.

Иммуноглобулины в молозиво извлекаются селективной секрецией из

сыворотки крови коров. Следовательно, специфичность антител в молозиве

определяется специфичностью антител в сыворотке крови коров. Кроме того,

уровень антител в сыворотке крови коров зависит от воздействия на

иммунокомпетентные клетки специфических иммуногенов, то есть активность

антител молозива коров является рефлекторным отражением специфичности

антигена. Вероятно, если определенные серотипы Е. coli имеются во внешней

среде (коровник, родильное отделение), коровы впоследствии продуцируют

специфические антитела и передают их через молозиво телятам. Это имеет

место в том случае, когда инвазивные вирулентные серотипы Е. coli вызывают

антигенную стимуляцию иммунокомпетентных клеток большую, чем не вирулентные

штаммы.

Высший средний титр колостральных антител анти-К антигена был установлен

против штамма О137:К79. Идентификация антител в сыворотке молозива и в

сыворотке крови телят против серотипов О78:К80 и О119:К69 в более низких

титрах и низшей частоте может постулироваться их незначительной

вирулентностью и инвазивностью или тем, что антитела обладают перекрестной

реакцией и не специфичны для этих серотипов.

Результаты абсорбционного теста сыворотки молозива и сыворотки крови

телят указывают на перекрестную абсорбцию антител против Е. coli К

антигенов исследуемых серотипов. Перекрестная абсорбция была, особенно,

очевидной с 2-мя типами В антигенов, так как абсорбция с 1 антигеном

идентифицирует антитела против 2 антигенов (О78:К80 и О119:К69). Эти данные

подтверждают значительную перекрестную реактивность антител к К-антигенам.

Такая кросс-реактивность антител обеспечивает защиту неонатальных телят

против инфекции с более чем 1 штаммом Е. coli . Следовательно, антитела с

перекрестной активностью против К антигенов Е. coli в естественных условиях

способствуют повышению резистентности неонатальных телят против различных

штаммов Е. coli .

Активность антител против К антигенов в молозиве и сыворотке телят 1-2

дневного возраста была более низкой чем активность против О антигенов.

Низкий титр К-антител в сыворотке неонатальных телят можно было

предположить, так как незначительная частота и низкий титр К-антител был в

молозиве коров. В кишечнике новорожденных телят иммуноглобулины

абсорбируются не селективно. Антитела против Е. coli К антигенов в молозиве

были резистентные против обработки 2-меркаптоэтанолом, как и антитела в

сыворотке новорожденных телят. Эти результаты указывают, что антитела не

являются макроглобулинами.

Различная концентрация антител (титр) в сыворотке новорожденных телят

против К и О антигенов указывает, что кормление молозивом может

стимулировать или подавлять синтез антител к определенным антигенам в

одинаковой степени независимо от места их локализации в бактериальных

клетках.

2.2.9. Протективный механизм молозива при колибактериозе новорожденных

телят. Выявление механизма протективного действия молозива при

колибактериозе новорожденных телят является определяющим фактором в

прогнозировании данного заболевания. В молозиве присутствуют протективные

антитела против Е. coli и низкое их содержание в отдельных образцах связано

с возрастом коров [Th. Smith and R. B. Little, 1922b]. В последующем [C.

Briggs, 1951], изучая антигенную структуру Е. coli , доказал, что реакция

между К антигеном и антителами связана с защитой и основана на

иммунологическом протективном значении молозива. Сущность протективного

фактора против колибактериоза ассоциируется с лактоглобулиновой фракцией

[R. Aschaffenburg, S. Bartlett, S. K. Kon, P. Terry, S. Y. Thompson and D.

M. Walker, 1949a; R. Aschaffenburg, S. Bartlett, S. K. Kon, J. M. Roy and

D. M. Walker, 1951a].

Молозиво от коров получали из хозяйств: «Кетросу» района Анений Ной и

ОПХ «Колоница» района Криулень. Молозиво (100 мл) нагревали до 37° С и

добавляли 4 мл разведенного (1:10) сычужного фермента. После отделения

сыворотки (через 30-60 мин) проводили фильтрацию для освобождения от

казеина. Бульонную культуру Е. coli тестировали для определения DL50 путем

внутрибрюшинного заражения белых мышей. Эта доза составила 0,25 мл. Мышей

заражали интраперитонально в дозе DL50 тест- микроорганизмами и через 2 ч

после инъекции вводили 0,5 молозивной сыворотки в разведении 1:5-1:20

соответственно титру. Мыши были под наблюдением в течение 72 ч. в порядке

дифференциации между «К» и «О» агглютинацией, суспензию готовили для тест

агглютинации следующим образом: 1- живая; 2- гретая при 100°С; 3- гретая

при 120°С 2 ч. В опытах использовали три серотипа Е. coli: О78:К80,

0119:К69, 0137:К79. Для протективного теста использовали 18-24 ч бульонную

культуру Е. соli каждого из вышеназванных серотипов.

Агглютинация («О», «К») и протективный тест на белых мышах представлены

в табл. 2.24. «К» антитела, содержащиеся в молозиве и обладающие

протективной активностью для белых мышей, отличались, как по титру, так и

по эффекту для разных серотипов и проб сывороток молозива. Тест

агглютинация против микробной суспензии, приготовленной тремя различными

методами, является убедительным доказательством характеризующим высокую

специфичность реакции. Данные табл. 2.24 подтверждают, что содержащиеся в

молозиве антитела-агглютинины против «К» антигена Е. соli обладают высокой

протективной активностью. Молозиво, содержащее антитела-агглютинины против

«О» антигена обеспечивает незначительную защиту. Пробы молозивной

сыворотки, не содержащие агглютинины против «К» и «О» антигенов, не

обладали протективной активностью. Следовательно, протективная

эффективность проб сывороток молозива против серотипов Е. соli может быть

установлена определением титра «К» антител.

Культура Е. соli была изолирована из крови яремной вены двух больных

телят, один из которых погиб через 24 ч, а другой через 36 ч. Телятам

скармливали молозиво и определяли массу тела, как у живых, так и у

погибших. Из одиннадцати телят, девять получавших 400 мл молозива в первое

кормление, погибали в течение двух недель. Исследованием штаммов Е. соli,

изолированных от этих телят определили содержание «К» антител-агглютининов

в пробах, используемого молозива. Изолированные штаммы Е. соli, выделённые

из крови сердца и костного мозга при аутопсии принадлежали к серотипам

О78:К80, О119:К69, О137:К79.

Таблица 2.24

Титр колостральных антител и протективные свойства молозивной сыворотки к

серотипам Е. coli, изолированных от павших телят.

|Серотипы |Тест |Пробы молозивной сыворотки |

| | |I |II |III |

|О78:К80 |«К» агглютинация |- |1:320 |- |

| |«О» агглютинация |1:80 |- |- |

| |Протективный |7/10* |5/10 |8/10 |

|О119:К69 |«К» агглютинация |1:640 |- |1:160 |

| |«О» агглютинация |- |1:80 |- |

| |Протективный |5/10 |8/10 |6/10 |

|О137:К79 |«К» агглютинация |1:1280 |1:160 |- |

| |«О» агглютинация |- |- |- |

| |Протективный |1/10 |7/10 |9/10 |

* летальность мышей отмечали в числителе, а количество зараженных в

знаменателе.

Исследованные пробы молозива различались как по титру, так и по

содержанию «К» антител по отношению к исследуемым серотипам Е. соli. Так,

например, проба молозива 1 не содержала «К» антител против серотипа

О78:К80, проба II – против серотипа О119:К69, проба III – против серотипов

О78:280; О137:К79.

Доказательством взаимосвязи между защитой телят молозивом и присутствием

в том же самом молозиве антител- агглютининов против «К» антигенов, в

частности, к исследуемым серотипам Е. соli подтверждается протективным

действием молозива – как результат специфической активности.

Так как, «К» антитела-агглютинины в молозиве являются фактором,

защищающим белых мышей против экспериментального колибактериоза,

эффективность проб молозива против определенных серотипов Е. coli можно

тестировать агглютинационным методом. Следовательно, энзоотия

колибактериоза новорожденных телят объясняется дефицитом агглютининов

против «К» антигена Е. coli. Молозиво, скармливаемое телятам, погибшим от

энзоотического колибактериоза, не содержало антител агглютининов против «К»

антигенов Е. coli , изолированных от павших телят.

Таким образом, протективный механизм молозива является в значительной

степени иммунологическим и ассоциируется с антителами против «К» антигенов

Е. coli , вызывающих колибактериоз неонатальных телят.

2.2.10. Факторы, влияющие на выживание новорожденных телят. Успешное

выращивание новорожденных телят зависит от целого ряда факторов, в том

числе от своевременного скармливания молозива в достаточном количестве, а

также от состояния молочной железы коровы, умения и мастерства

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7